-06-16组培学习
葡萄：(Vitisvinifera)为葡萄科葡萄属多年生的藤本浆果果树。其果实味美可口，营养价值较高，可生食，也可以作为葡萄酒、葡萄汁、罐头等加工品的生产原料，市场需求量日益增加。但葡萄生产会受到26种病毒的危害，造成葡萄的长势减弱，产量降低，风味变劣。利用组织培养技术，可在短期内快繁大量葡萄种苗，大大加速了名、优、新品种苗木的繁殖速度；也可以获得脱病毒苗木和实现优良种质资源的离体保存。
1实验材料的选择与催芽处理将通过休眠期的插条埋人沙床中，置于培养室中或较干净温暖的催芽床上令其萌发，待新梢长出3节以上时，选取顶芽和侧芽为外植体。取材时，应尽量在无菌的条件下剪取嫩枝，如用酒精棉球擦洗尖刀、消毒盛放嫩枝的器皿等，以减少细菌的污染。
2取材与消毒将剪取的嫩枝先除去幼叶，剪成一定长度的茎段，务使每段上都带有腋芽或顶芽，用自来水冲洗2h一3h，再将材料放人无菌水中，置4摄氏度冰箱内处理4h，实验证明这样预处理可使材料更易诱导再生。将材料从冰箱中取出，用自来水加0.02％的餐洗净浸泡10min，浸泡过程中经常摇动(但不要用玻璃棒等搅动)，以便使清洗液与茎段充分接触，比较彻底地清除材料表面的尘土和菌物。浸泡后，用自来水冲洗10min以上，以彻底除去餐洗净，将冲洗后的材料转入干净的三角瓶。
在超净工作台上，往三角瓶中加入75％的酒精，浸泡20s(因葡萄芽对酒精敏感，酒精消毒不宜超过20s)，倒掉酒精，用无菌蒸馏水漂洗1次，将芽转入经高压消毒的三角瓶中，加入0.1％升汞液，浸泡8min，浸泡过程中要经常摇动三角瓶，以使升汞液与材料充分接触。倒掉升汞液，用无菌蒸馏水冲洗4—6次，每次2min，以彻底除去升汞。
3接种芽分化培养基是MS+6-BA0.5mg／L一1.0mg／L，PH5.8，加热至70摄氏度时加人琼脂粉5.0g／L，煮沸1min后分装于mL三角瓶中，用羊皮纸封口，高压灭菌20min后备用。
消毒完毕之后，将材料从三角瓶中取出，放在消毒滤纸上将水分吸干，将茎段基部在无菌滤纸上切一新面，并切成一定长度的小段，但每一段都应有芽，芽朝上接种于芽分化培养基上。将其放在培养室内培养，培养条件为温度25℃～28℃，光照16h／d，光照度为lx。培养2周后，可见许多绿色的芽点和小的不定芽出现。再经一段时间可长出许多小芽，芽簇生于一起很难分开，且小苗在分化培养基中生长缓慢，要想让小苗长大，需将小苗转入壮苗培养基。
4壮苗与继代培养壮苗培养基是MS+6-BA0.4mg／L～0.6mg／L，pH5.8，加热至70℃时加入琼脂粉5.0g／L，煮沸lmin后分装于mL或mL三角瓶中，高压灭菌20min后备用。
从芽再生培养基上选取较大的不定芽，转接到壮苗培养基，每个三角瓶可放5—8个。该培养基既可以作壮苗用，又可以作继代用。在常规培养室内，经3周左右，小芽即可长成4cm左右高的无根苗。葡萄在此培养基中生长繁殖很快，每4周可繁殖5倍左右，因此每间隔4周就需要继代1次。
如果要将试管苗移栽到温室栽培，则还必须先转到生根培养基上诱导生根。
5生根培养生根培养基是1／2MS+NAA0.1mg／L一0.3mg／L，pH6.0，加热至70℃时加入琼脂粉5.5g／L～6.0g／L。煮沸1min后分装于mL或mL三角瓶中，用羊皮纸封口，高压灭菌20min后备用。
从壮苗培养基上选取3cm一4cm高的壮苗，在无菌滤纸上用解剖刀从基部切去3mm一5mm，将小苗转到生根培养基上，每瓶7—8株为宜。将三角瓶置于常规培养室中，2周后可见根原基形成。
6移栽待根长至1cm左右时，将捆扎三角瓶的绳子或皮筋解开，但不要把盖子拿掉。将三角瓶转到低于培养室温度，最好有散射太阳光的地方，炼苗1周后移栽。
移栽用的基质最好是灭过菌的蛭石，如无灭菌条件，可用杀菌剂和杀虫剂预先处理蛭石，移栽时首先轻轻洗去根部的培养基，用镊子将苗移入蛭石，注意不要伤着根。移人后浇透水，用塑料薄膜盖好，并在塑料膜上打些小孔，以利于气体交换，将其放到温室中，1周后逐渐揭去塑料膜。这时的植株已基本适应温室中的环境，2周后植株开始长出新叶，根也开始伸长，同时还会有许多新根长出，此时可连同蛭石一起移入盆中或苗圃内。
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